紫外可见分光光度计的用途及波长校正分析

　　紫外可见分光光度计分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其*的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。紫外可见分光光度法的定量分析基础是朗伯-比尔(Lambert-Beer)定律。朗伯定律是说明光的吸收与吸收层厚度成正比，比耳定律说明光的吸收与溶液浓度成正比;如果同时考虑吸收层厚度和溶液浓度对光吸收率的影响，即朗伯-比耳定律。

　　一、用途主要归纳为以下几点

　　1、鉴定物质。用来测量待测物质对可见光的吸光度并进行定量分析的仪器，称为可见分光光度计;紫外可见分光光度计用来测量待测物质对可见光或紫外光(200~760nm)的吸光度并进行定量分析的仪器。可以测定核酸和蛋白的浓度，也可以测定细菌细胞密度。

　　2、待测物质是标准物及标准图谱对照进行分析。

　　3、比较z大吸收波长吸收系数的一致性。

　　4、物质的纯度检验。

　　5、推测化合物的分子结构及构成。

　　6、是判定络合物的组成及稳定常数的测定。

　　二、紫外可见分光光度计的波长怎样校正。

　　1．调整

　　（1） 在接通电源前，应对仪器的安全性进行检查，电源线接线应牢固，接地线通地要良好，各个调节旋钮的起始位置应该正确，然后再接通电源。

　　（2） 将灵敏度旋钮调至“1”档（放大倍率z小）。调波长调节器至所需波长。

　　（3） 开启电源开关，指示灯亮，选择开关置于“T”，调节透光率[100%T]旋钮使数字显示[100.0]左右，预热20min .

　　根据溶液浓度大小，选择液层厚度合适的吸收池。

　　2．校正

　　（！）打开吸收池暗室盖（光门自动关闭），调节[0% T]旋钮，使数字显示为“00.0”，盖上吸收池盖，将参比溶液置于光路，使光电管受光，调节透光率[100% T] 旋钮，使数学显示为“100.0”。

　　（2）如果显示不到“100”，则可适当增加电流放大器灵敏度档数，但应尽可能使用低档数，这样仪器将有更高的稳定性。当改变灵敏度 后必须重新校正“0”和“100”。

　　（3）按（1）连续几次调整“00.0”和“100.0”后，如将选择开关置于“A”，调节吸光度调零旋钮，使数字显示为“.000”，即可进行下面吸光度A的测量；如将选择开关置于“C”，将标准溶液推入光路，调节浓度旋钮，使得数字显示值为已知标准溶液浓度数值，即可进行下面浓度c的测量。

　　3．测定

　　（1)吸光度Ａ的测量。将要测Ａ的试样溶液推入光路，显示值即为待测样品的吸光度值Ａ。

　　（2)浓度c的测量。将要测c试样溶液推入光路，即可读出待测样品的浓度值c。

　　4．结束

　　测量完毕，关闭电源，将各调节旋钮恢复至初始位置。取出吸收池洗净，晾干，存于专用盒内。

　　5.注意事项：

　　（1)使用前，使用者应该首先了解本仪器的结构和原理，以及各个旋钮之功能。

　　（2)仪器接地要良好，否则显示数字不稳定。

　　（3)如果大幅度改变测试波长时，在调整“00.0”和“100”后稍等片刻（因光能量变化急剧，光电管受光后响应缓慢，需一段光响应平衡时间），当稳定后，重新调整“00.0”和“100”即可工作。

　　（4)仪器左侧下角有一只干燥剂筒，应保持其干燥，发现干燥剂变色应立即更新或烘干后再用。

　　（5)当仪器停止工作时，关掉电源，电源开关需同时切断，并罩好仪器。